接下來路易絲犯了一個更大的錯誤。1521年，波旁公爵查理的妻子蘇珊娜病故，之前他們的兒子也夭折了，1522年，波旁公爵的岳母，那位令人畏懼的安娜公主也去世。路易絲身為波旁家族的後人，趁機提出對波旁財產的要求。並向波旁公爵求婚，願意透過婚姻來解決兩人的遺產紛爭。可波旁公爵對成為國王的繼父並不感興趣，斷然拒絕。路易絲惱羞成怒之下，兩人打起官司，法院凍結了波旁公爵的財產，雖然有利於波旁公爵的證據更多，但法院還是判波旁公爵敗訴。轉眼間，波旁公爵查理失去兒子、妻子、大部分財產、遭到逼婚，又察覺到國王對自己的嫉妒。失望之下，他與查理五世暗暗交往，後來陰謀敗露，他叛逃到查理五世那裡。這個曾經富個敵國的波旁公爵，此時窮困得只剩下寶劍和斗篷。

波旁公爵查理，從法國的最高統帥成為法國最大的對手。1524年，波旁公爵與查理五世的另兩名將領佩斯卡拉、科隆納對法國駐守的米蘭發動進攻，在比亞格拉斯擊敗前來增援的法軍。此戰中，富有傳奇色彩的“無可挑剔的無敵騎士”巴亞爾戰死。當他奄奄一息時，查理•德•波旁見到他，深表憐惜，騎士回答道：“可憐憫的不是我，而是你，因為你是對你的君主和你的祖國作戰。”

波旁公爵查理給法國帶來的損失還不止這些。1525年3月，在義大利的帕維亞，波旁公爵率領的帝國大軍擊潰了法國，法國方面戰死的有邦尼維特元帥，特雷維爾元帥，德•富瓦元帥、阿朗松公爵以及德意志僱傭軍的統帥薩福克、洛林的弗朗索瓦等，被俘的更是不計其數，第一個便是國王弗朗索瓦一世，他也成了繼路易九世、約翰二世、路易十一之後，第四個被俘的法國國王。此外被俘的還有納瓦爾國王亨利•德•阿爾佈雷、蒙莫朗西元帥等。當天，查理•德•波旁以勝利者的姿態，看望了被俘的國王弗朗索瓦，這讓他無地自容。他給母親路易絲的信中寫道：“除榮譽及生命外，兒已一無所有。”

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